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真菌磷酸化蛋白提取試劑盒

簡(jiǎn)要描述：產(chǎn)品概述 product description 磷酸化是細(xì)胞信號(hào)傳遞系統(tǒng)的組成部分,在許多生命活動(dòng)中扮演重要角色,如基因與代謝活動(dòng)的調(diào)節(jié),細(xì)胞分化,腫瘤形成,細(xì)胞周期現(xiàn)象,由生長(zhǎng)因子和激素激發(fā)的信號(hào)傳遞等。 貝博® BBproExtra® 真菌磷酸化蛋白提取試劑盒適用于從各種真菌細(xì)胞和實(shí)體組織中提取磷酸化蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。 本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。 本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。 本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

  • 產(chǎn)品型號(hào)：
  • 廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間：2024-11-24
  • 訪  問(wèn)  量：202

詳細(xì)介紹

保存溫度
2-8℃
注意事項(xiàng)
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！
有效期
一年
檢測(cè)方法
磷酸化蛋白質(zhì)譜,2-D,IEF,
WB,IP,EMSA等
適用樣本
真菌
產(chǎn)品特點(diǎn)
1.使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過(guò)研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。
2.將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
4.紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
5.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
產(chǎn)品應(yīng)用
磷酸化蛋白質(zhì)譜,2-D,IEF,
WB,IP,EMSA等
儀器準(zhǔn)備
1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.勻漿機(jī)/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
試劑準(zhǔn)備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
耗材準(zhǔn)備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項(xiàng)
使用注意事項(xiàng)：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
? 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

使用方法
新鮮樣本：
1. 提取液準(zhǔn)備：
每500 μl冷的提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取清洗干凈的100-200 mg新鮮真菌組織/細(xì)胞樣本用刀盡可能剪碎，加入500 μl提取液A后用勻漿機(jī)/勻漿器充分勻漿。
3. 將勻漿液吸入一個(gè)預(yù)冷的干凈離心管中在4℃振蕩30分鐘-1小時(shí)。
4. 在4℃，12000×g條件下離心10-15分鐘。
5. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到真菌蛋白。
6. 上述蛋白提取物請(qǐng)分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

凍存樣本：
1. 凍存樣本參照上述樣本步驟操作。
2. 凍存樣本中直接加入5-10倍體積的蛋白提取液，振蕩30分鐘。
3. 在4℃，12000×g條件下離心15分鐘。
4. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到總蛋白。
5. 上述蛋白提取物請(qǐng)分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

常見問(wèn)題分析
1.蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時(shí)可能沒(méi)有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑A的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒(méi)有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過(guò)透析處理或者用脫鹽柱改換過(guò)緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
參考文獻(xiàn)
1.Na Zhao, Xinyue Xu, Yashitola Wamboldt, Sally A. Mackenzie, et al.
MutS HOMOLOG1 silencing mediates ORF220 substoichiometric shifting and causes male sterility in Brassica juncea
Journal of Experimental Botany 2016 67 (1): 435-444. （IF=5.677）

2.XiaokangLi, LiMu, DandanLi, et al.
Effects of the size and oxidation of graphene oxide on crop quality and specific molecular pathways
Carbon 2018 （IF=7.082）

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