植物種子蛋白提取試劑盒

簡要描述：產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 植物種子蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種高淀粉含量的植物種子樣品中提取可溶性蛋白。如水稻、蕎麥、玉米、小麥等。提取過程簡單方便。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

產(chǎn)品型號：
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
更新時間：2024-11-24
訪問量：84

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產(chǎn)品分類

CLASSIFICATION

蛋白質(zhì)生物學

蛋白提取和裂解細胞器分離蛋白純化蛋白質(zhì)濃縮和緩沖液置換蛋白定量蛋白凝膠電泳免疫組織化學查看全部產(chǎn)品

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詳細介紹

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

WB,IP等

適用樣本

植物種子

產(chǎn)品應用

WB,IP等

儀器準備

1.離心機
2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒

試劑準備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

使用方法

1. 將適量待提取種子樣本剝皮，用PBS或純水洗滌3次。
2. 將樣本置研缽液氮充分研磨。
3. 加入1 ml蛋白提取液A充分混勻，移入離心管。
4. 將離心管置振蕩器輕輕振蕩30分鐘-60分鐘。
5. 在4℃，15000×g離心20分鐘。
6. 收集上清，棄沉淀。
7. 在900 μl上清液體樣本中加入100 μl試劑B，充分混勻。
8. 冰浴或4℃冰箱靜置30分鐘以上。
9. 在4℃，15000×g以上條件下離心15分鐘。
10. 小心移除上層清液丟棄，留沉淀。
11. 將離心管倒置在吸水紙上干燥離心管。
12. 加入200 μl試劑C到離心管中。
13. 在4℃，15000×g以上條件下離心15分鐘。棄上清，留沉淀。
14. 將離心管倒置在吸水紙上干燥離心管。
15. 用40 μl - 100 μl試劑D溶解蛋白沉淀，充分混勻。
16. 在4℃，10000×g條件下離心10分鐘。
17. 收集上清用于下游實驗。

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
部分植物種子蛋白豐度極低，在條件允許的情況下，需要盡可能加大種子樣本的上樣量。
處理部分樣本時可能沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑E中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

參考文獻

1.Xiaokang Li, et al.
Effects of the size and oxidation of graphene oxide on crop quality and specific molecular pathways
Carbon 2018 （IF=7.082）

2.Na Zhao, et al.
MutS HOMOLOG1 silencing mediates ORF220 substoichiometric shifting and causes male sterility in Brassica juncea
Journal of Experimental Botany 2016 （IF=5.677）

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