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甲醛固定組織蛋白提取試劑盒

簡要描述：產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 甲醛固定組織蛋白提取試劑盒適用于從各種經(jīng)甲醛固定的組織樣本中提取總蛋白，提取過程簡單方便，提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。 本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請(qǐng)使用貝博其他貨號(hào)的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理（相關(guān)產(chǎn)品BB-38113）。 貝博® BBproExtra® 可以提供各種蛋白質(zhì)提取、裂解、酶活測定、細(xì)胞器分離、免疫組織化學(xué)、蛋白表達(dá)、蛋白標(biāo)記等蛋白質(zhì)相關(guān)試劑盒產(chǎn)品。

  • 產(chǎn)品型號(hào)：
  • 廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間：2025-01-01
  • 訪  問  量：96

詳細(xì)介紹

保存溫度
2-8℃
注意事項(xiàng)
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！
有效期
一年
檢測方法
WB,IP等
適用樣本
動(dòng)物組織
產(chǎn)品應(yīng)用
WB,IP等
儀器準(zhǔn)備
1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
試劑準(zhǔn)備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
耗材準(zhǔn)備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項(xiàng)
使用注意事項(xiàng)：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
? 注意低豐度蛋白的檢測方法。
? 離心機(jī)轉(zhuǎn)速有相對(duì)離心力（RCF，×g）和每分鐘轉(zhuǎn)速（RPM，r/min）兩種表示方式，有些離心機(jī)設(shè)置有RPM和×g顯示切換，但部分離心機(jī)沒有自動(dòng)切換功能。需要用下面的公式進(jìn)行換算：
g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 為有效離心半徑，即從離心機(jī)軸心到離心收集管底部中心位置的長度，單位為厘米) 例如: 轉(zhuǎn)速為3000 rpm，有效離心半徑為10 cm，則相對(duì)離心力（RCF，×g）為=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。

?
使用方法
1. 提取液制備：
每500 μl蛋白提取液中加入5 μl蛋白提取液B，混勻后備用。
2. 將組織樣品用刀剪碎，每100 mg樣本中加入500 μl蛋白提取液，渦旋振蕩10秒。
3. 在恒溫器（Heat Block）或水浴鍋中100℃保溫20分鐘。
4. 渦旋振蕩10秒混勻。
5. 在恒溫器（Heat Block）或水浴鍋中60℃保溫1-2小時(shí)。
6. 渦旋振蕩10秒混勻。
7. 在12000×g條件下離心15分鐘。
8. 將上清吸入另一干凈離心管，即可得到總蛋白。
9. 將上述蛋白提取物定量后分裝保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。
常見問題分析
1.蛋白濃度低？
固定組織的蛋白質(zhì)回收率在30%左右。
需要加大組織上樣量，調(diào)整提取液用量來調(diào)整蛋白濃度。

2.WB實(shí)驗(yàn)無條帶？
固定組織的蛋白質(zhì)回收率在30%左右。低豐度蛋白通常較難檢出。
甲醛固定的蛋白質(zhì)末端基團(tuán)與甲醛之間形成交聯(lián)鏈，各種氨基，亞氨基及酰氨基，肽，胍基，羥基，SH和芳香環(huán)等都會(huì)參與甲醛固定蛋白質(zhì)的基團(tuán)反應(yīng)，在這個(gè)過程中，絕大部分常規(guī)的暴露抗原決定基團(tuán)遭到破壞，從甲醛固定樣本回收的蛋白質(zhì)做WB成功的概率較低，選用抗體說明書上同時(shí)可以做WB和IHC的抗體。
參考文獻(xiàn)
1.Wei Liu et al.
TRIP6 regulates the proliferation, migration, invasion and apoptosis of osteosarcoma cells by activating the NF?κB signaling pathway
Experimental and Therapeutic Medicine 2020

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