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細(xì)胞外酸化率(ECAR)檢測(cè)方法

更新時(shí)間:2024-07-30      點(diǎn)擊次數(shù):367

細(xì)胞外酸化(Extracellular Acidification ;ECA)測(cè)量可以為糖酵解(glycolytic)活性研究提供豐富的信息,細(xì)胞外酸化率(ECAR)的檢測(cè)可用于代謝表征并確定具體的干預(yù)措施(如養(yǎng)分缺失、缺氧、藥物治療或遺傳基因操控)如何影響糖酵解通量。

細(xì)胞代謝與癌癥、心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病、肥胖、糖尿病及干細(xì)胞等多個(gè)領(lǐng)域息息相關(guān)。糖酵解是真核細(xì)胞中的關(guān)鍵代謝途徑,在分化、增殖和 ATP 生成等生理過(guò)程中起重要作用。糖酵解的改變對(duì)多種疾病也具有重要意義,包括但不限于癌癥、心血管疾病和代謝疾病。

能量代謝指標(biāo)胞外酸化率(ECAR)可幫助研究人員更多地了解細(xì)胞對(duì)外界的應(yīng)激反應(yīng)和運(yùn)作機(jī)制。但以往細(xì)胞代謝的檢測(cè)技術(shù)存在較多限制,例如難以對(duì)細(xì)胞代謝進(jìn)行連續(xù)、實(shí)時(shí)的檢測(cè);一些專門檢測(cè)細(xì)胞代謝的儀器、硬件貴,試劑耗材消耗成本高,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性低且只能檢測(cè)有限指標(biāo)。

與傳統(tǒng)的終點(diǎn)糖酵解分析不同, 該糖酵解分析可以實(shí)時(shí)測(cè)定細(xì)胞外酸化率  (ECAR),可以觀察糖酵解機(jī)制的短暫變化和快速反應(yīng)。樣品不需要密封處理,在這些條件下, ECAR 是一種可靠且穩(wěn)定的糖酵解活性測(cè)定方法。

細(xì)胞外酸化率(ECAR)檢測(cè)試劑盒(Extracellular acidification Rate Assay Kit)(BB-48311)是利用合成的酸化檢測(cè)熒光探針 BBcellProbe® P61 來(lái)檢測(cè)細(xì)胞外酸化情況變化的試劑盒??梢酝ㄟ^(guò)簡(jiǎn)單的混合基于熒光酶標(biāo)儀便捷的直接進(jìn)行細(xì)胞外酸化情況的動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)測(cè)定??梢詫?shí)時(shí)測(cè)量細(xì)胞糖酵解活性,是以高通量形式來(lái)評(píng)估用于代謝表征的細(xì)胞呼吸以及評(píng)估治療對(duì)細(xì)胞功能毒性作用的一種可靠方法。

它可以使用熒光酶標(biāo)儀在標(biāo)準(zhǔn)微孔板上進(jìn)行簡(jiǎn)單動(dòng)力學(xué)測(cè)定。隨著糖酵解作用的進(jìn)行,丙酮酸轉(zhuǎn)化為乳酸,這將導(dǎo)致細(xì)胞外環(huán)境 pH 降低。P61 探針可以靈敏地檢測(cè)到 pH 降低,并表現(xiàn)為 P61 探針熒光信號(hào)增加,從而實(shí)現(xiàn)對(duì) ECAR 的測(cè)定。

P61 最大激發(fā)波長(zhǎng)為 488nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為 580nm。其熒光在堿性條件下強(qiáng)度較弱,反之酸性條件下變強(qiáng),從而 P61 可被用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞外酸化的變化。在測(cè)定中,細(xì)胞外酸化率由熒光信號(hào)隨時(shí)間的變化計(jì)算。細(xì)胞外酸化增加,熒光信號(hào)的變化率增加;反之,酸化減少,熒光信號(hào)的變化率降低。


細(xì)胞酸化檢測(cè)試劑盒可以用于直接,實(shí)時(shí)分析細(xì)胞外酸化情況。本試劑盒可以用來(lái)測(cè)量各種全細(xì)胞(貼壁和懸浮細(xì)胞),各種 3D 培養(yǎng)物,組織,小生物,球體,支架和基質(zhì)等。




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